Các sản phẩm

Để định lượng cụ thể một số chất chuyển hóa của 5-fluorouracil (5-FU) và hai nucleotide monophosphate nội sinh, chúng tôi đã phát triển một phương pháp ban đầu dựa trên sắc ký lỏng ghép khối phổ song song (LC-MS/MS).Thử nghiệm này cho phép xác định: (i) quá trình sản xuất 5-fluoro-2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (5-FdUMP) nội bào từ 5-FU hoặc 5-fluoro-2′-deoxyuridine (5-FdUrd) , (ii) tác động của nồng độ 5-FdUMP đối với tỷ lệ 2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (dUMP)/thymidine-5′-monophosphate (TMP) nội bào và (iii) mức độ bài tiết của 5-FdUMP và 5-FU từ tế bào nuôi cấy của con người bằng chất vận chuyển ABC.Trong điều kiện thí nghiệm của chúng tôi, các tế bào được ủ với 5-FU hoặc 5-FUrd.Sau đó, protein tế bào được kết tủa bằng metanol.Quy trình này cung cấp khả năng thu hồi chiết xuất cao.Ngoài ra, để đo sự bài tiết 5-FU và 5-FdUMP từ tế bào, chúng tôi tiến hành định lượng các phân tử này trong môi trường nuôi cấy.Môi trường được tiêm trực tiếp (5-FU) hoặc được chiết xuất pha rắn bằng cách sử dụng hộp chiết Oasis Wax (5-FdUMP).Việc phân tách các chất phân tích được thực hiện trên cột dC18 Atlantis 3,5 μm, (id 100 mm × 2,1 mm) với chế độ đẳng tích sử dụng dung dịch đệm amoni formate/metanol/nước (5/5/90, v/v) làm pha động.Thời gian chạy không vượt quá 6,2 phút.Các chất phân tích được ion hóa trong bề mặt phun điện ở chế độ ion âm.Chúng tôi đã xác thực phương pháp trong phạm vi 2,5–150 ng mL −1 theo các hợp chất.Độ biến thiên giữa các lần phân tích và giữa các lần phân tích thấp hơn 10% trong bảy ngày.Tất cả các hợp chất đều ổn định trong tế bào hoặc trong môi trường nuôi cấy khi các mẫu được bảo quản ở -20°C trong ít nhất hai tuần và sau ba chu kỳ đóng băng-tan băng.Không có hiệu ứng ma trận đã được quan sát trong cả hai phương tiện truyền thông.