Các sản phẩm

X-gal (còn được viết tắt là BCIG cho 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside) là một hợp chất hữu cơ bao gồm galactose được liên kết với một indol được thay thế.Hợp chất được tổng hợp bởi Jerome Horwitz và các cộng tác viên vào năm 1964. Tên hóa học chính thức thường được rút ngắn thành các cụm từ ít chính xác hơn nhưng cũng ít rườm rà hơn như bromochloroindoxyl galactoside.X từ indoxyl có thể là nguồn của X trong quá trình co X-gal.X-gal thường được sử dụng trong sinh học phân tử để kiểm tra sự hiện diện của một enzym, β-galactosidase, thay cho mục tiêu thông thường của nó, một β-galactoside.Nó cũng được sử dụng để phát hiện hoạt động của enzyme này trong mô hóa học và vi khuẩn học.X-gal là một trong nhiều indoxyl glycoside và este tạo ra các hợp chất màu xanh không hòa tan tương tự như thuốc nhuộm màu chàm do quá trình thủy phân được xúc tác bởi enzyme.

X-gal là một chất tương tự của lactoza, và do đó có thể bị thủy phân bởi enzym β-galactosidase, enzym này sẽ cắt liên kết β-glycosid trong D-lactose.X-gal, khi bị phân cắt bởi β-galactosidase, tạo ra galactose và 5-bromo- 4-chloro-3-hydroxyindole - 1. Chất này sau đó tự dime hóa và bị oxy hóa thành 5,5'-dibromo-4,4'-dichloro -indigo - 2, một sản phẩm màu xanh đậm không hòa tan.Bản thân X-gal không màu, do đó, sự hiện diện của sản phẩm có màu xanh lam do đó có thể được sử dụng làm phép thử cho sự hiện diện của-galactosidase hoạt động.Điều này cũng cho phép β-galactosidase của vi khuẩn (được gọi là lacZ) được sử dụng như một chất báo cáo trong các ứng dụng khác nhau.

Trong phân tích lai hai loại, β-galactosidase có thể được sử dụng làm chất báo cáo để xác định các protein tương tác với nhau.Trong phương pháp này, các thư viện bộ gen có thể được sàng lọc về sự tương tác với protein bằng cách sử dụng hệ thống nấm men hoặc vi khuẩn.Khi có sự tương tác thành công giữa các protein được sàng lọc, nó sẽ dẫn đến sự liên kết của miền kích hoạt với một trình khởi động.Nếu promoter được liên kết với gen lacZ, thì việc sản xuất β-galactosidase, dẫn đến sự hình thành các khuẩn lạc có sắc tố xanh khi có mặt X-gal, do đó sẽ cho thấy sự tương tác thành công giữa các protein.Kỹ thuật này có thể bị giới hạn trong việc sàng lọc các thư viện có kích thước nhỏ hơn khoảng 106. Sự phân tách thành công X-gal cũng tạo ra mùi hôi đáng chú ý do sự bay hơi của indole.

Vì bản thân X-gal không màu, nên sự có mặt của sản phẩm có màu xanh lam có thể được sử dụng làm phép thử cho sự có mặt của β-galactosidaza hoạt động.

Việc xác định dễ dàng một enzym hoạt động này cho phép gen của βgalactosidase (gen lacZ) được sử dụng làm gen báo cáo trong nhiều ứng dụng khác nhau.