Có rất nhiều anh hùng thầm lặng xung quanh chúng ta, những người tưởng chừng như bình thường, nhưng thực ra họ đã âm thầm đóng góp rất nhiều cho chúng ta.Proteinase K là “anh hùng thầm lặng” trong ngành chẩn đoán phân tử, mặc dù so với “ông lớn và quyền lực” trong ngành, proteinase K quá thấp đến mức chúng ta đã bỏ qua tầm quan trọng của nó từ lâu.Với sự bùng phát của đại dịch vương miện mới, nhu cầu về proteinase K tăng vọt, nguồn cung trong và ngoài nước kém xa mức tiêu thụ, mọi người chợt nhận ra rằng proteinase K rất quan trọng.
Việc sử dụng proteinase K là gì
Proteinase K là một protease serine có hoạt tính enzyme phân giải protein và có thể duy trì hoạt động trong nhiều môi trường (pH (4-12,5), đệm muối cao, nhiệt độ cao 70°C, v.v.).Ngoài ra, hoạt động của proteinase K không bị ức chế bởi SDS, urê, EDTA, guanidine hydrochloride, guanidine isothiocyanate, v.v., và một lượng chất tẩy rửa nhất định cũng có thể tăng cường hoạt động của proteinase K. Trong điều trị y tế (khử trùng vi rút và vi khuẩn ), thực phẩm (làm mềm thịt), da (làm mềm tóc), sản xuất rượu vang (làm sạch rượu), điều chế axit amin (lông bị thoái hóa), chiết xuất axit nucleic, lai tạo tại chỗ, v.v., proteinase K Có ứng dụng.Ứng dụng được sử dụng phổ biến nhất là chiết xuất axit nucleic.
Proteinase K có thể phân giải tất cả các loại protein trong mẫu bằng enzym, bao gồm cả những histone liên kết chặt chẽ với axit nucleic, để axit nucleic có thể được giải phóng khỏi mẫu và giải phóng vào dịch chiết, tạo điều kiện thuận lợi cho bước chiết xuất và tinh chế tiếp theo.Trong việc phát hiện axit nucleic của virus, proteinase K là một trong những thành phần quan trọng trong dung dịch lấy mẫu virus.Proteinase K có thể bẻ khóa và vô hiệu hóa protein vỏ của vi rút, an toàn hơn trong giai đoạn vận chuyển và phát hiện;Ngoài ra, proteinase K cũng có thể phân hủy RNase, ngăn chặn sự phân hủy RNA của virus và tạo điều kiện thuận lợi cho việc phát hiện axit nucleic.
Sự nổi tiếng qua đêm của proteinase K
Cho dù trong lĩnh vực nghiên cứu khoa học hay lĩnh vực IVD, chiết xuất axit nucleic là thí nghiệm cơ bản nhất, vì vậy proteinase K luôn là một sự tồn tại rất quan trọng.Tuy nhiên, trong quá khứ, proteinase K ít được biết đến hơn nhiều so với vai trò của nó.Một phần lớn của điều này là do mối quan hệ cung và cầu của proteinase K rất ổn định.Ít người nghĩ rằng việc cung cấp proteinase K sẽ là một vấn đề.
Với sự bùng phát của đại dịch vương miện mới, nhu cầu xét nghiệm axit nucleic đã tăng lên.Tính đến cuối tháng 6 năm 2020, Trung Quốc đã hoàn thành gần 90 triệu cuộc thử nghiệm vương miện mới và con số này thậm chí còn đáng báo động hơn trên phạm vi toàn cầu.Trong các thí nghiệm chiết xuất axit nucleic, nồng độ hoạt động của proteinase K là khoảng 50-200 μg/mL.Thông thường, cần khoảng 100 μg proteinase K để chiết xuất một mẫu axit nucleic.Trong thực tế sử dụng, để tăng hiệu quả tách chiết axit nucleic, người ta thường sử dụng Proteinase K với hàm lượng tăng dần.Việc phát hiện axit nucleic của coronavirus mới đã mang lại một lượng lớn nhu cầu về proteinase K.Sự cân bằng cung cầu ban đầu của proteinase K nhanh chóng bị phá vỡ và proteinase K trở thành nguyên liệu phòng chống dịch bệnh quan trọng chỉ sau một đêm.
Khó khăn trong việc sản xuất proteinase K
Mặc dù với sự phát triển của dịch bệnh, giá trị quan trọng của proteinase K đã được mọi người coi trọng, nhưng điều đáng tiếc là do hàm lượng proteinase K quá thấp nên rất ít công ty trong nước tham gia sản xuất proteinase K. Khi mọi người muốn thiết lập sản xuất proteinase K Trong quá trình sản xuất, người ta phát hiện ra rằng proteinase K là một loại protein cực kỳ đặc biệt.Việc mở rộng năng lực sản xuất proteinase K trong một khoảng thời gian ngắn là vô cùng khó khăn.
Việc sản xuất proteinase K quy mô lớn gặp phải những khó khăn sau
1. Biểu hiện thấp
Proteinase K có thể phân hủy không đặc hiệu hầu hết các protein và gây độc tính nghiêm trọng cho tế bào chủ biểu hiện.Do đó, mức độ biểu hiện của proteinase K nói chung là rất thấp.Sàng lọc các hệ thống biểu hiện và các chủng biểu hiện cao proteinase K thường đòi hỏi một chu kỳ dài hơn.
2. Dư lượng sắc tố và axit nucleic
Quá trình lên men quy mô lớn giới thiệu một lượng lớn sắc tố và dư lượng axit nucleic của vật chủ.Rất khó để loại bỏ các tạp chất này bằng một quy trình thanh lọc đơn giản và quá trình thanh lọc phức tạp sẽ làm tăng chi phí và giảm tỷ lệ thu hồi.
3. Sự bất ổn
Proteinase K không đủ bền, có thể tự phân giải và khó bảo quản ổn định ở 37°C trong thời gian dài nếu không có chất bảo vệ.
4. Dễ kết tủa
Khi chuẩn bị bột đông khô proteinase K, để đảm bảo rằng hàm lượng proteinase K trong bột đông khô lớn, cần phải thêm chất bảo vệ đông khô ở nồng độ cao, nhưng khi nồng độ proteinase K đạt 20mg/mL trở lên, rất dễ kết tụ tạo thành kết tủa, gây khó khăn lớn cho quá trình đông khô proteinase K có hàm lượng chất rắn cao.
5. Đầu tư lớn
Proteinase K có hoạt tính protease mạnh và có thể thủy phân các protease khác trong phòng thí nghiệm.Do đó, proteinase K đòi hỏi phải có khu vực sản xuất, thiết bị và nhân sự chuyên biệt để nghiên cứu và phát triển và sản xuất.
Dung dịch proteinase K của XD BIOCHEM
XD BIOCHEM has a mature protein expression and purification platform, and has rich experience in the expression and purification of recombinant proteins and optimization of production processes. Through the rapid formation of a research and development team, the large-scale production process of proteinase K has been overcome. The monthly output of freeze-dried powder is more than 30 KG. The product has stable performance, high enzyme specific activity, and no host cytochrome and nucleic acid residues. Welcome to contact XD BIOCHEM Obtain a trial package (E-mail: sales@xdbiochem.com Tel: +86 513 81163739).
Các giải pháp kỹ thuật của XD BIOCHEM bao gồm
Sử dụng tích hợp plasmid đa bản sao, các chủng biểu hiện cao với mức biểu hiện 8g/L được chọn, giúp khắc phục vấn đề mức độ biểu hiện thấp của proteinase K;
Thông qua việc thiết lập quy trình thanh lọc nhiều bước, dư lượng axit nucleic và cytochrom chủ của proteinase K đã được loại bỏ thành công dưới giá trị tiêu chuẩn;
Thông qua sàng lọc thông lượng cao các công thức đệm bảo vệ, một đệm có thể lưu trữ ổn định proteinase K ở 37°C đã được chọn;
Dung dịch đệm sàng lọc khắc phục được vấn đề proteinase K dễ tổng hợp và kết tủa ở nồng độ cao, đồng thời tạo nền tảng cho quá trình đông khô hàm lượng chất rắn cao của proteinase K.
XD BIOCHEM proteinase mẫu K
Kiểm tra độ ổn định của XD BIOCHEM proteinase K: sẽ không có thay đổi đáng kể nào trong hoạt động sau 80 ngày ở nhiệt độ phòng
Kiểm tra độ ổn định của XD BIOCHEM proteinase K: sẽ không có thay đổi đáng kể nào trong hoạt động sau 80 ngày ở nhiệt độ phòng
So sánh hiệu quả tách chiết axit nucleic của XD BIOCHEM proteinase K và các sản phẩm cạnh tranh.Trong quá trình chiết xuất axit nucleic, XD BIOCHEM và proteinase cạnh tranh K được sử dụng tương ứng.Hiệu quả chiết xuất của XD BIOCHEM proteinase K cao hơn và giá trị Ct của gen mục tiêu thấp hơn.
Thời gian đăng bài: 31-Dec-2021