Các sản phẩm

Xét nghiệm sắc ký lỏng hiệu năng cao mới đối với glycosyltransferase dựa trên quá trình tạo dẫn xuất với axit anthranilic và phát hiện huỳnh quang.

Các xét nghiệm được phát triển bằng cách sử dụng hóa chất ghi nhãn duy nhất của axit 2-aminobenzoic (2AA; axit anthranilic, AA) để đo hoạt tính của cả β1-4 galactosyltransferase (GalT-1) và α2-6 sialyltransferase (ST-6) bằng chất lỏng hiệu suất cao sắc ký (HPLC) với phát hiện huỳnh quang (Anumula KR. 2006. Những tiến bộ trong phương pháp tạo dẫn xuất huỳnh quang để phân tích sắc ký lỏng hiệu năng cao của glycoprotein carbohydrate. Anal Biochem. 350:1-23).N-Acetylglucosamine (GlcNAc) và N-acetyllactosamine được sử dụng làm chất nhận và uridine diphosphate (UDP)-galactose và cytidine monophosphate (CMP)-N-acetylneuraminic acid (NANA) tương ứng làm chất cho GalT-1 và ST-6.Các sản phẩm enzym được dán nhãn tại chỗ bằng AA và được tách ra khỏi chất nền trên cột TSKgel Amide 80 sử dụng điều kiện pha bình thường.Đơn vị enzym được xác định từ diện tích pic bằng cách so sánh với các chất chuẩn được tạo dẫn xuất đồng thời Gal-β1-4GlcNAc và NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.Độ tuyến tính (thời gian và nồng độ enzyme), độ chính xác (trong và giữa các xét nghiệm) và khả năng tái lập cho các xét nghiệm đã được thiết lập.Các xét nghiệm đã được chứng minh là hữu ích trong việc theo dõi các hoạt động của enzyme trong quá trình phân lập và tinh chế.Các xét nghiệm có độ nhạy cao và được thực hiện bằng hoặc tốt hơn so với các phép đo dựa trên đường phóng xạ truyền thống.Định dạng xét nghiệm cũng có thể được sử dụng để đo hoạt tính của các enzym chuyển khác, với điều kiện là chất nhận cacbohydrat chứa đầu khử để ghi nhãn.Một xét nghiệm cho chất nhận glycoprotein đã được phát triển bằng cách sử dụng IgG.Một phương pháp lập hồ sơ HPLC ngắn đã được phát triển để tách IgG glycans (hai tuần một lần G0, G1, G2, đơn chất và khử thẩm tách), tạo điều kiện thuận lợi cho việc xác định các hoạt tính GalT-1 và ST-6 một cách nhanh chóng.Hơn nữa, phương pháp lập hồ sơ này sẽ tỏ ra hữu ích để theo dõi những thay đổi của IgG glycans trong môi trường lâm sàng.