Các sản phẩm

Cấu trúc liên kết màng của miền kênh colicin E1 được nghiên cứu bằng phương pháp truyền năng lượng cộng hưởng huỳnh quang (FRET).FRET liên quan đến một axit amin huỳnh quang được mã hóa di truyền (coumarin) với tư cách là người hiến tặng và dư lượng cysteine ​​​​được dán nhãn chọn lọc được buộc bằng DABMI (4-(dimethylamino) phenylazophenyl-4'-maleimide) với tư cách là người chấp nhận FRET.Gốc coumarin huỳnh quang được tích hợp vào protein thông qua cặp tRNA/aminoacyl-tRNA synthetase trực giao cho phép tích hợp có chọn lọc vào bất kỳ vị trí nào trong miền kênh colicin.Mỗi biến thể chứa một đột biến dừng (TAG) đối với sự kết hợp của coumarin và một đột biến cysteine ​​(TGT) đối với phần đính kèm DABMI.Sáu khoảng cách xen kẽ trong các vòng xoắn 1-6 được xác định bằng cách sử dụng phân tích FRET cho cả trạng thái hòa tan và liên kết màng.Dữ liệu FRET cho thấy những thay đổi lớn về khoảng cách giữa các vòng xoắn giữa các vòng xoắn 3-6 khi liên kết màng cung cấp cái nhìn sâu sắc mới về cấu trúc liên kết màng của miền kênh.Nói chung, hiệu suất liên xoắn của coumarin-DABMI FRET giảm khi liên kết màng, dựa trên mô hình ô cho kênh colicin.Một mô hình dự kiến ​​cho trạng thái đóng của miền kênh đã được phát triển dựa trên dữ liệu FRET hiện tại và đã được công bố trước đây.Mô hình đề xuất sự sắp xếp vòng tròn của các vòng xoắn 1-7 theo chiều kim đồng hồ từ phía ngoại bào và sự liên kết giữa các bề mặt màng của các vòng xoắn 1, 6, 7 và 10 xung quanh kẹp tóc xuyên màng trung tâm được hình thành bởi các vòng xoắn 8 và 9.