Các sản phẩm

Cách thức mà các tác động của các đột biến đồng thời kết hợp với nhau để thay đổi hoạt động của enzym không dễ dự đoán được vì những tác động này không phải lúc nào cũng cộng gộp theo cách tuyến tính.Do đó, đặc tính của tác động của các đột biến đồng thời của dư lượng axit amin liên kết với cơ chất có thể đóng góp đáng kể cho sự hiểu biết về tính đặc hiệu của cơ chất của enzyme.Trong beta-glycosidase từ Spodoptera frugiperda (Sfbetagly), cả hai gốc Q39 và E451 đều tương tác với chất nền và điều này rất cần thiết để xác định tính đặc hiệu của chất nền.Các đột biến kép của Sfbetagly (A451E39, S451E39 và S451N39) được điều chế bằng phương pháp gây đột biến tại chỗ, biểu hiện ở vi khuẩn và được tinh chế bằng sắc ký ái lực.Các enzym này được đặc trưng bằng cách sử dụng p-nitrophenyl beta-galactoside và p-nitrophenyl beta-fucoside làm cơ chất.Tỷ lệ k cat/Km đối với các đột biến đơn và kép của Sfbetagly chứa các đột biến định hướng tại chỗ ở các vị trí Q39 và E451 đã được sử dụng để chứng minh rằng tác động đối với năng lượng tự do của dao găm ESdouble (phức hợp trạng thái chuyển đổi enzyme) của các đột biến kép (Gdouble daggerxy) không phải là tổng các hiệu ứng do các đột biến đơn lẻ (Gdouble daggerx và Gdouble daggery).Sự khác biệt trong dao găm Gdouble này chỉ ra rằng tác động của các đột biến đơn lẻ trùng lặp một phần.Do đó, hiệu ứng chung này chỉ được tính một lần trong Gdouble daggerxy.Dữ liệu tinh thể học về beta-glycosidase cho thấy sự hiện diện của liên kết hydro hai đầu răng liên quan đến gốc Q39 và E451 và cùng một nhóm hydroxyl của cơ chất.Do đó, cả dữ liệu nhiệt động lực học và tinh thể học đều cho thấy dư lượng Q39 và E451 gây ảnh hưởng lẫn nhau đến các tương tác tương ứng của chúng với chất nền.