Các sản phẩm

Phosphoryl hóa protein điều chỉnh các chức năng đa dạng của tế bào và đóng vai trò chính trong sự phát triển ban đầu của thực vật.Để bổ sung và mở rộng dựa trên các nghiên cứu trước đây về quá trình phosphoryl hóa protein ở cây giống Arabidopsis, chúng tôi đã sử dụng một phương pháp thay thế kết hợp chiết xuất protein trong điều kiện không làm biến tính với sắc ký ái lực ion kim loại cố định (IMAC) làm giàu phosphoprotein nguyên vẹn trong chiết xuất đã cạn kiệt Rubisco, sau đó là nhận dạng sử dụng điện di trên gel hai chiều (2-DE) và sắc ký lỏng ghép nối khối phổ (LC-MS/MS).Quá trình tiêu hóa trypsin trong gel và phân tích các điểm gel đã chọn đã xác định được 144 peptit và gốc phosphoryl hóa, trong đó chỉ có 18 phosphopeptide và 8 phosphosite được tìm thấy trong cơ sở dữ liệu vị trí phosphoryl hóa PhosPhAt 4.0 và P3DB Arabidopsis thaliana.Hơn một nửa trong số 82 phosphoprotein được xác định có liên quan đến chuyển hóa carbohydrate, quang hợp/hô hấp hoặc cơ chế phản ứng với stress oxy hóa sms.Làm giàu phosphoprotein nguyên vẹn trước 2-DE và LC-MS/MS dường như giúp tăng cường phát hiện dư lượng threonine và tyrosine được phosphoryl hóa so với các phương pháp sử dụng làm giàu ở mức độ peptide, cho thấy rằng hai phương pháp này phần nào bổ sung cho nhau về mức độ bao phủ của vị trí phosphoryl hóa.So sánh kết quả đối với cây con với kết quả thu được trước đó đối với lá Arabidopsis trưởng thành đã xác định được 5 loại protein được phosphoryl hóa khác nhau trong các mô này, cho thấy tiềm năng của kỹ thuật này trong việc nghiên cứu động lực học của quá trình phosphoryl hóa protein trong quá trình phát triển của cây.